心肌细胞在缺氧损伤之后，其形态及功能都会发生很大变化，细胞膜的破损是心肌细胞损伤的一个重要表现。细胞凋亡时，线粒体△ψm下降，说明细胞内膜结构发生改变，膜通透性增加。最近的研究发现，地奥心血康能够提高受损心肌细胞的线粒体△ψm。

天津医科大学药理教研室将Wistar新生大鼠(1—3天)的心肌细胞进行分离，然后分为5组：C组（为对照组)：实验时更换无血清培基，置CO2培养箱内孵育24小时，然后用复氧液漂洗细胞2次，加入复氧液置培养箱3小时后，再换复氧液孵育2小时；A/R组（缺氧/复氧组)：采用Koyama等方法建立缺氧/复氧模型，实验时弃去原培养液，用缺氧液漂洗细胞2次，换高浓度氮气饱和的缺氧液，培养板置于95％N/5％CO2持续通气的缺氧密闭容器中(37℃)3小时，再换预先用纯氧饱和的复氧液，以95％O2/5％CO2进行复氧孵育2小时；地奥心血康低、中、高剂量干预组：缺氧/复氧前用终浓度分别为10、20、40mol/ml的地奥心血康与细胞共同孵育30 分钟，其他操作同A/R组。

观察指标：①心肌细胞搏动率及细胞形态学变化；②心肌细胞存活率；③心肌细胞线粒体膜电位△ψm)变化和细胞[Ca+]i水平变化。

结 果 

各组心肌细胞博动频率和存活率

培养的心肌细胞形态为梭形、星形或三角形，C组心肌细胞同步节律性自发搏动频率为90～120beat/min，节律规则，收缩有力；A/R组心肌细胞搏动频率减慢，幅度减弱，节律不齐，部分停搏；地奥心血康干预的各剂量组与A／R组比较搏动明显增强而规则。A/R组心肌细胞严重受损，细胞存活率较C组显著降低，地奥心血康干预的各剂量组心肌细胞受损较A/R组明显减轻，差异有统计学意义（P<0.01)，见表1。 

各组心肌细胞线粒体膜电位和细胞[Ca+]i水平变化

   A/R组缺氧/复氧损伤后心肌细胞线粒体△ψm明显下降，[Ca+]i显著升高；地奥心血康干预使降低的线粒体△ψm显著升高(P<0.01)，[Ca+]i超载明显减轻(P<0.01)。

本实验A/R组心肌细胞线粒体Rh123荧光强度明显下降，提示A/R组线粒体损伤，导致△ψm下降；单独给予地奥心血康，线粒体Rh123荧光强度有轻微下降，但与C组比较没有显著性差异，表明地奥心血康对正常心肌细胞△ψm几乎无影响；与A/R组比较，地奥心血康干预组△ψm明显升高，提示地奥心血康对线粒体功能具有保护作用。

诱导细胞凋亡的因素很多，在心肌缺氧/复氧损伤引起的细胞凋亡，主要机制可能为自由基增多和[Ca+]i水平升高。本实验以荧光强度间接代表细胞内的平均[Ca+]i水平，经荧光强度统计分析后发现，地奥心血康干预组[Ca+]i荧光强度比A/R组显著降低，反映复氧后的钙超载减轻。 

本实验证实了心肌细胞在发生缺氧/复氧损伤后，△ψm明显下降，说明细胞调亡发生与△ψm降低有关。地奥心血康能使△ψm显著升高，表明它可以减轻缺氧/复氧对心肌细胞的损伤，其作用机制之一可能是通过保护线粒体膜实现。细胞凋亡的发生也与[Ca+]i超载相关，地奥心血康能使复氧后细胞的[Ca+]i超载减轻，可使凋亡受到抑制，对A/R损伤的心肌细胞发挥重要的保护作用。